目前牧草种子鉴定包括品种真实性和纯度检验,品种真实性鉴定包括田间种植鉴定和室内快速鉴定。田间小区种植鉴定属表型鉴定,周期长、费用高,无法满足种子贸易中快速鉴定的要求;而室内快速鉴定属生理鉴定,周期短、费用低,满足种子贸易中快速鉴定的要求。室内快速鉴定方法有:同工酶电泳鉴定技术,蛋白质电泳鉴定技术和DNA电泳鉴定技术。
1 同工酶电泳技术
同工酶电泳技术是牧草种子检验和鉴别种、品种的一种常用方法,早在上世纪80年代就有人开始采用该技术进行有关牧草品种遗传差异的鉴定工作。但是同工酶电泳技术也有不足之处:⑴由于同工酶是基因表达的最后产物,它不能完全显示品种间的多态性,对于亲缘关系比较密切的自交系及其杂交种间的多态性难以鉴定。⑵技术有一定难度,从酶提取到电泳的整个过程必须保持低温,以防止酶失活。
2 蛋白质电泳技术
蛋白质电泳方法是目前品种鉴定广为推广的一种常用方法,蛋白质电泳分为种子贮藏蛋白和同工酶两类,在品种鉴定和纯度分析时各有特点。蛋白质电泳方法具有电泳结果稳定,不受贮藏年限的影响等优点,避免了同工酶活性受时空影响的局限性,而且是基因表达的产物,品种间种子贮藏蛋白质组成的差异直接反应了品种间遗传上的差异。
3 DNA分子标记技术
DNA 分子标记技术又称DNA指纹技术,不同品种的遗传基础不同,其DNA碱基排列顺序不同。由于DNA指纹图谱直接反映DNA水平上的差异,因而成为当今最先进的遗传标记技术系统。
4 快速鉴定技术的应用前景
品种鉴定和种子纯度检测技术在生产上相当重要,而检测方法对于种子准确鉴定具有重要意义田间形态学的方法在70年代以前是主要的检测方法,在品种鉴定和种子纯度分析上起过很重要的作用,但随着育种亲本的利用集中化,品种鉴定愈来愈困难,传统形态学方法愈来愈不适应品种鉴定和纯度分析。
同工酶电泳技术比形态学方法投入少、速度快,在一些牧草品种鉴定上有一定效果。同工酶技术能分析大量样品,技术比较简单,但同工酶是基因产物,具有组织特异性、可利用数量少、多态性少、对酶提取要求高等缺点,因而在应用上有一定的局限性。
蛋白质电泳能产生品种特征特性的蛋白质分子标记,能准确地区分开,其稳定性、重复性好,具有很高的实用性,目前应用很广泛。
DNA分子标记技术的出现,有利于品种鉴定和纯度分析,特别是从种子提取DNA的方法的改进,使得DNA标记技术鉴定品种和纯度分析更是蓬勃发展。当然DNA分子标记技术将有广阔的应用前景。
内蒙古自治区饲料草种监督检验站
张连义